Poslední úprava: RNDr. Daniel Kavan, Ph.D. (29.09.2021)
Toto praktikum je určeno pro studenty učitelství chemie.
Praktikum zajišťují: Daniel Kavan, Veronika Hýsková, Josef Chmelík, Kateřina Bělonožníková, Lukáš Fojtík, Josef Dvořák a Zuzana Kalaninová
Studenti se seznámí se základními biochemickými metodami. Metodou, která má široké uplatnění v biochemii, je gelová chromatografie, studenti separují protein ze směsi nebo stanoví relativní molekulovou hmotnost neznámého proteinu. Separace proteinů a stanovení relativní molekulové hmotnosti se provádí rovněž elektroforézou v polyakrylamidovém gelu v přítomnosti SDS. Velká pozornost je věnována zásadám práce s enzymy: stanovení specifické aktivity enzymu, zjištění afinity enzymu k substrátu, stanovení maximální rychlosti reakce, pH optima, sledování časového průběhu reakce a vliv inhibitorů a aktivátorů na enzymovou reakci. Přítomnost izoenzymů je demonstrována na příkladu laktátdehydrogenasy, kterou studenti separují v polyakrylamidovém gelu za nativních podmínek a detekují enzymovou aktivitu v gelu.
Poslední úprava: RNDr. Daniel Kavan, Ph.D. (07.02.2019)
Practical course in biochemistry is provided by Daniel Kavan, Veronika Hýsková, Josef Chmelík, Kateřina Bělonožníková, Růžena Lišková and Jan Fiala.
The students are dealing with basic biochemical methods. Gel filtration is used for protein purification from a mixture or for relative molecular mass determination. The students determine the relative molecular mass of proteins by SDS polyacrylamide gel electrophoresis. Important part of the practical course is dealing with enzymes, determination of Michaelis constant, maximal reaction rate, pH optimum, activation and inhibition, electrophoretic separation of isoenzymes and their detection in gel.
Literatura
Poslední úprava: RNDr. Daniel Kavan, Ph.D. (07.02.2018)
Skripta ke stažení Laboratorní cvičení z biochemie, editoři: Doc. RNDr. M. Kodíček, CSc. a Doc. RNDr. O. Valentová, CSc.; Praha 2000
Požadavky ke zkoušce
Poslední úprava: RNDr. Daniel Kavan, Ph.D. (29.09.2021)
Podmínky získání zápočtu:
1. provedení všech úloh praktika
2. napsání výstupního testu a prezentace zvolené úlohy
3. odevzdání zkontrolovaných a opravených protokolů
Sylabus -
Poslední úprava: RNDr. Daniel Kavan, Ph.D. (29.09.2021)
Studenti vypracují vždy jednu úlohu z následujících okruhů úloh:
1. Gelová chromatografie
2. Separace proteinů elektroforézou v polyakrylamidovém gelu v prostředí SDS a stanovení relativní molekulové hmotnosti těchto proteinů
3. Sledování afinity enzymu k substrátu - určení Michaelisovy konstanty a maximální rychlosti reakce
(4. Určení pH optima, sledování vlivu inhibitorů a aktivátorů na aktivitu enzymu, časový průběh enzymové reakce, detekce enzymové aktivity v polyakrylamidovém gelu)
Pro úspěšnou práci v praktiku je nezbytné ovládat software používaný k vyhodnocování výsledků (tabulkový procesor - výpočty se vzorci, sestavení správného typu grafu, chybové úsečky; grafický program - ořez a projasnění fotografií; matematický program - provedení nelineární regrese). K dispozici jsou vzorové protokoly, které slouží jednak jako vzor odevzdávaných výsledků a jednak si podle nich studenti mohou předem vyzkoušet vyhodnocování dat.
Poslední úprava: prof. RNDr. Helena Ryšlavá, CSc. (07.02.2011)
1. Gel chromatography of proteins (separation, relative molecular mass determination)
2. SDS - polyacrylamide electrophoresis (determination of relative molecular mass of proteins)
3. Practical enzymology - kinetic characteristics, Michaelis constants, maximal reaction rate, pH optimum, activation and inhibition of enzymes, electrophoretic separation of isoenzymes and detection of the enzyme activity in gel
