Poslední úprava: RNDr. Michaela Čermáková, Ph.D. (19.04.2021)
Studenti se seznámí se základními biochemickými metodami používanými při izolaci proteinů a nukleových kyselin. Provádí extrakci proteinů z přírodních materiálů, centrifugaci, vysolování, dialýzu, lyofilizaci. Další metodou, která má široké uplatnění v biochemii, je gelová chromatografie, studenti separují protein ze směsi nebo stanoví relativní molekulovou hmotnost neznámého proteinu. Separace proteinů a stanovení relativní molekulové hmotnosti se provádí rovněž elektroforézou v polyakrylamidovém gelu v přítomnosti SDS. Velká pozornost je věnována zásadám práce s enzymy: stanovení specifické aktivity enzymu, zjištění afinity enzymu k substrátu, stanovení maximální rychlosti reakce, pH optima, sledování časového průběhu reakce a vliv inhibitorů a aktivátorů na enzymovou reakci. Přítomnost izoenzymů je demonstrována na příkladu laktátdehydrogenasy, kterou studenti separují v polyakrylamidovém gelu za nativních podmínek a detekují enzymovou aktivitu v gelu. Součástí praktika jsou ústní závěrečné prezentace a diskuse týkající se dosažených výsledků.
Poslední úprava: RNDr. Daniel Kavan, Ph.D. (31.01.2022)
Practical course in biochemistry is provided by Daniel Kavan, Veronika Hýsková, Josef Chmelík and Kateřina
Bělonožníková
.
The students are dealing with basic biochemical methods used for protein and nucleic acid isolation and their
characterization (extraction, centrifugation, precipitation, dialysis, protein content determination).
Gel filtration is used for protein purification from a mixture or for relative molecular mass determination. The
students determine the relative molecular mass of proteins by SDS polyacrylamide gel electrophoresis. An
important part of the practical course is dealing with enzymes, determination of Michaelis constant, maximal
reaction rate, pH optimum, activation and inhibition, electrophoretic separation of isoenzymes and their detection
in the gel.