Students will become familiar with basic biochemical methods. A method that has wide application in biochemistry is gel chromatography, students separate a protein from a mixture or determine the relative molecular mass of an unknown protein. Separation of proteins and determination of relative molecular mass is also performed by electrophoresis in polyacrylamide gel in the presence of SDS. Great attention is paid to the principles of working with enzymes: determination of specific enzyme activity, determination of enzyme affinity for the substrate, determination of maximum reaction rate, pH optimum, monitoring of the reaction time course and the influence of inhibitors and activators on the enzyme reaction. The presence of isoenzymes is demonstrated on the example of lactate dehydrogenase, which students separate in a polyacrylamide gel under native conditions and detect enzyme activity in the gel.
Last update: Kavan Daniel, RNDr., Ph.D. (17.12.2024)
Studenti se seznámí se základními biochemickými metodami. Metodou, která má široké uplatnění v biochemii, je gelová chromatografie, studenti separují protein ze směsi nebo stanoví relativní molekulovou hmotnost neznámého proteinu. Separace proteinů a stanovení relativní molekulové hmotnosti se provádí rovněž elektroforézou v polyakrylamidovém gelu v přítomnosti SDS. Velká pozornost je věnována zásadám práce s enzymy: stanovení specifické aktivity enzymu, zjištění afinity enzymu k substrátu, stanovení maximální rychlosti reakce, pH optima, sledování časového průběhu reakce a vliv inhibitorů a aktivátorů na enzymovou reakci. Přítomnost izoenzymů je demonstrována na příkladu laktátdehydrogenasy, kterou studenti separují v polyakrylamidovém gelu za nativních podmínek a detekují enzymovou aktivitu v gelu.
Last update: Kavan Daniel, RNDr., Ph.D. (17.12.2024)
|