Náplní diplomové práce "Příprava nanočástic pro terapii viru žloutenky typu B", kterou bude vypracovávat Bc. Zuzana Kružíková, bude příprava a charakterizace nanočástic nesoucích mRNA kódující specifickou CRISPR/Cas9 nukleasu pro cílenou úpravu genomu. Nejprve se studentka bude soustředit na vypracování metodiky přípravy velkého množství in vitro přepisované mRNA obsahující čepičku a polyA konec, případně další segmenty prodlužující její buněčnou životnost. Tato mRNA bude kódovat fluorescentní protein ke snadné kvalitativní a kvantitativní analýze. Poté přistoupí k vypracování metodiky přípravy nanočástic, schopných přepravovat mRNA, na bázi liposomů či polyplexů, které bude možné specificky cílit do určitých buněk. Po úspěšném zvládnutí modelových přístupů se studentka zaměří na konkrétní problematiku cíleného přenosu nukleas na bázi CRISPR/Cas9. Mezi konkrétní cíle bude patřit virus hepatitidy typu B.
Preliminary scope of work in English
The diploma thesis "Preparation of nanoparticles for hepatitis B viral therapy", which will be conceived by Bc. Zuzana Kružíková, will include preparation and characterization of nanopraticles enabling specific cell targeting and harboring mRNA encoding CRISPR/Cas9 nuclease for specific gene editing. At first, the student will focus on large scale preparation of in vitro transcribed mRNA with Cap and polyA tail, or even further segments prolonging it´s half life such as UTR´s etc. This mRNA will encode fluorescent protein in order to easily quantify the transfection process as well as quality of the mRNA delivery. Next, he will focus on preparation of nanoparticles with mRNA as a cargo, enabling specific cell targeting. After successful achievement of the "proof of concept" principle, the student will focus on specific CRISPR/Cas9 nuclease delivery. HBV will represent our specific target.
