Náplní doktorské práce "Nanočástice pro cílené doručování nukleových kyselin", kterou bude vypracovávat Mgr. Vojtěch Dolejš, bude příprava a charakterizace nanočástic nesoucích mRNA kódující specifickou CRISPR/Cas9 nukleasu pro cílenou úpravu genomu. Nejprve se student bude soustředit na vypracování metodiky přípravy velkého množství in vitro přepisované mRNA obsahující čepičku a polyA konec, případně další segmenty prodlužující její buněčnou životnost. Tato mRNA bude kódovat fluorescentní protein ke snadné kvalitativní a kvantitativní analýze. Poté přistoupí k vypracování metodiky přípravy nanočástic, schopných přepravovat mRNA, na bázi liposomů či polyplexů, které bude možné specificky cílit do určitých buněk. Po úspěšném zvládnutí modelových přístupů se student zaměří na konkrétní problematiku cíleného přenosu nukleas na bázi CRISPR/Cas9. Mezi konkrétní cíle bud patřit například virus Hepatitidy typu B či virus HIV.
Preliminary scope of work in English
The doctoral thesis "Nanoparticles for specific nucleic acid delivery", which will be conceived by MSc. Vojtěch Dolejš, will include preparation and characterization of nanopraticles enabling specific cell targeting and harboring mRNA encoding CRISPR/Cas9 nuclease for specific gene editing. At first, the student will focus on large scale preparation of in vitro transcribed mRNA with Cap and polyA tail, or even further segments prolonging it´s half life such as UTR´s etc. This mRNA will encode fluorescent protein in order to easily quantify the transfection process as well as quality of the mRNA delivery. Next, he will focus on preparation of nanoparticles with mRNA as a cargo, enabling specific cell targeting. After successful achievement of the "proof of concept" principle, the student will focus on specific CRISPR/Cas9 nuclease delivery. HBV and HIV will represent our targets.
