Současné terapie chronické hepatitidy B analogy nukleot(s)idů mohou inhibovat tvorbu nových infekčních virových částic, ale neeliminují HBV, protože HBV vytváří v hepatocytech stabilní kovalentně uzavřenou cirkulární DNA (cccDNA). Léčba pegylovaným interferonem alfa (IFN-alfa) může být považována za alternativní terapii, která vede k trvalé inhibici proteinů HBV, destrukci cccDNA a vyléčení až u 15% pacientů. Tato zjištění přitahují pozornost k plazmacytoidním dendritickým buňkám (pDC), které jsou hlavním zdrojem interferonu typu I (IFN-I, alfa/βeta/omega) a prozánětlivých cytokinů v lidském organismu. Infekce HBV však neindukuje, ale naopak zhoršuje produkci IFN-alfa v pDC. Na inhibici funkcí pDC by se mohlo podílet několik mechanismů, včetně sekrece HBV proteinů nebo virových částic, ale také sekrece extracelulárních váčků (exosomy, mikrozomy, apoptotická tělíska) buněčného původu. K určení faktoru (faktorů) zodpovědných za inhibici funkce pDC vyvineme model hepatického mikroprostředí. V tomto modelu budeme zkoumat účinek HBV na funkci pDC po těsném kontaktu buněk během ko-kultivace mezi infikovanými hepatocyty a naivními pDC, nebo alternativně po expozici naivních pDC různým frakcím bezbuněčného supernatantu (proteiny HBV, virové částice, extracelulární váčky) hepatocytů infikovaných HBV. Budeme také zkoumat, zda farmakologické cílení signalizace regulačních receptorů, jmenovitě MEK1/2-ERK, může zlepšit funkčnost pDC vystavených HBV. Identifikace těchto inhibičních mechanismů by mohla vést k lepšímu pochopení modulace vrozené imunitní odpovědi a k identifikaci cílů schopných obnovit funkce pDC. Cílem naší studie je obnovit funkce pDC vystavených HBV s cílem inhibovat produkci HBV, eradikovat cccDNA v hepatocytech infikovaných HBV a použít reaktivované pDC v adjuvantní terapii.
Předběžná náplň práce v anglickém jazyce
Current therapies of chronic hepatitis B by nucleot(s)ide analogues can inhibit formation of new infectious viral particles but do not eliminate HBV because HBV establishes in hepatocytes a stable covalently closed circular DNA (cccDNA). Pegylated interferon α (IFN-α) treatment can be considered as an alternative therapy, which results in sustained inhibition of HBV proteins, destruction of cccDNA and cure in up to 15% of patients. These discoveries attract attention to plasmacytoid dendritic cells (pDCs), which are a major source of type I interferon (IFN-I, α/β/ω) and proinflammatory cytokines in human organism. However, HBV infection does not induce, but impairs production of IFN-α in pDCs. Several mechanisms could be involved in the inhibition of pDC functions, including secretions of HBV proteins or virus particles, but also secretions of extracellular vesicles (exosomes, microsomes, apoptotic bodies) of cellular origin. To determine the factor(s) responsible for the inhibition of pDC function, we will develop a hepatic microenvironment model. In this model, we will investigate the effect of HBV on pDC function after a close cell contact during co-culture between infected hepatocytes and naive pDCs, or alternatively, after exposure of naïve pDCs to different fractions of cell-free supernatant (HBV proteins, virus particles, extracellular vesicles) of HBV-infected hepatocytes. We will also investigate whether pharmacologic targeting of regulatory receptor signaling, namely MEK1/2-ERK pathway, can improve functionality of HBV-exposed pDCs. The identification of these inhibitory mechanisms could lead to a better understanding of the modulation of the innate immune response and to the identification of the targets able to restore pDCs functions. The objective of our study is to restore functions of pDCs exposed to HBV in order to inhibit HBV production, to target cccDNA in HBV-infected hepatocytes and to use reinvigorated pDCs in adjuvant therapy.
- zadáno vedoucím/školitelem